SA-β-gal的檢測方法，你了解多少？

　　生衰退的變化過程。細(xì)胞衰老時(shí)，衰老相關(guān)半乳糖苷酶(SA-β-gal)的活性會(huì)顯著增加，故常常檢測衰老相關(guān)半乳糖苷酶的活性以區(qū)分正常細(xì)胞與衰老細(xì)胞。目前，不同條件或化合物作用細(xì)胞后，常常用衰老相關(guān)半乳糖苷酶檢測作為細(xì)胞衰老的標(biāo)志之一。
 

　　SA-β-gal檢測方法主要分為細(xì)胞化學(xué)染色法和熒光法。
 

　　一、細(xì)胞化學(xué)染色法：SA-βgal在pH6.0時(shí)，可將5-溴-4-氯-3-吲哚基β-D-吡喃半乳糖苷水解，產(chǎn)生不溶于水的藍(lán)色物質(zhì)。這種藍(lán)色產(chǎn)物相當(dāng)穩(wěn)定，固定干燥后避光可保存幾個(gè)月。通過計(jì)算總?cè)后w中藍(lán)色細(xì)胞的數(shù)量，可以很容易地確定SA-β-半乳糖苷酶陽性的細(xì)胞比例，即衰老細(xì)胞的比例。但是需要注意的是，在所有細(xì)胞中普遍存在酸性半乳糖苷酶，在pH4.0時(shí)發(fā)揮作用。其實(shí)SA-βgal發(fā)揮作用的最適pH為4.5，但是在pH4.5時(shí)，酸性半乳糖苷酶也會(huì)水解底物，因此需要使用SA-βgal次適pH6.0，才能確保藍(lán)色產(chǎn)物是由于SA-βgal的作用而產(chǎn)生的。通常我們使用pH為6.0的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。
 

　　二、熒光法：熒光法需要借助另一種底物——C12FDG，不具有熒光，能透過細(xì)胞膜，但被βgal水解后可產(chǎn)生綠色熒光產(chǎn)物。利用流式細(xì)胞儀可檢測綠色熒光的產(chǎn)生，藉此反映βgal的表達(dá)。因此要想檢測SA-βgal的活性，需要先將溶酶體堿化至pH6.0。這一過程可使用氯喹或巴弗洛霉素A1等，可降低溶酶體的酸度，使溶酶體堿化至pH6.0。然后向細(xì)胞中加入C12FDG，孵育后制成可供流式分析細(xì)胞懸液，即可利用FC500MPL流式細(xì)胞儀等檢測SA-βgal的表達(dá)。
 

　　SA-β-gal細(xì)胞化學(xué)染色法通常需要半小時(shí)染色，數(shù)小時(shí)甚至一天時(shí)間等待染色完成以觀察和計(jì)數(shù)，而熒光法需要4至8小時(shí)處理細(xì)胞，1天內(nèi)可完成計(jì)數(shù)。前者不僅可用于細(xì)胞培養(yǎng)液還可用以組織切片的染色，而且所需試劑和設(shè)備簡單，而后者更為高效，靈敏，定量更為準(zhǔn)確。因此，根據(jù)實(shí)驗(yàn)的不同目的可選擇不同的檢測方法。